Tlenek azotu i cykliczne GMP w sygnalizacji komórkowej i rozwoju leków ad

Kinetyczne właściwości aktywności różniły się w dwóch typach preparatów tkankowych, a najbardziej uderzającą cechą była kooperacyjna katalityczna kinetyka aktywności cząstek w odniesieniu do substratowego trifosforanu guanozyny (GTP). Przeciwnie, aktywność rozpuszczalnej cyklazy guanylowej (sGC) wykazała typową kinetykę Michaelisa-Mentena; odkrycie to sugerowało, że aktywność sGC reprezentuje pojedyncze katalityczne miejsce GTP. Chociaż podejrzewaliśmy, że enzym ma różne izoformy, nie można wykluczyć fałszywych danych artefaktowych, ponieważ nasze surowe preparaty zawierały także nukleotydazy, fosfatazy i fosfodiesterazy, które konkurowały ze sobą. dla substratu lub produktu. Odpowiedź na to pytanie ostatecznie wymagałaby oczyszczenia, scharakteryzowania, klonowania, ekspresji i ponownej charakterystyki enzymu, co zajęło nam kilkanaście lat. Gdyby rzeczywiście istniały różne izoformy cyklazy guanylowej w różnych przedziałach wewnątrzkomórkowych, być może byłyby one regulowane przez różne grupy hormonów i leków, aby wytworzyć oddzielne wewnątrzkomórkowe przedziały cyklicznej GMP o różnych funkcjach. Dość szybko projekt wykazał duży potencjał i wzbudził ogromne emocje w naszym laboratorium. Aby uzyskać skrót i tymczasowo uniknąć oczyszczenia enzymu, dodaliśmy do naszych inkubatorów różnorodne substancje, aby zahamować fosfatazy, nukleotydazy i fosfodiesterazy; ten krok pozwolił nam na nowo zdefiniować kinetyczne zachowanie enzymu.7
Skrót doprowadził nas do drugiej zaskakującej i nieoczekiwanej obserwacji. Niektóre z tych substancji, w tym azydek sodu, azotyn sodu i hydroksyloamina, aktywowały enzym.7 Chociaż kilka hormonów zwiększyło cykliczną GMP w nietkniętych tkankach, jak wspomniano powyżej, nie miały one wpływu na wolne od komórek preparaty. Myśleliśmy, że te nowe aktywatory cyklazy guanylowej mogą nam pomóc odtworzyć aktywację hormonalną w homogenatach i określić ich molekularny mechanizm sprzężenia. Ta intuicja okazała się prawidłowa.
Aktywacja azydku była specyficzna tkankowo, wymagała tlenu, była wzmacniana niektórymi tiolami, takimi jak cysteina, i trwała kilka minut, zanim osiągnęła maksymalną szybkość reakcji. Podejrzewaliśmy, że azydek został przekształcony w naszych inkubacjach w aktywator cyklazy guanylowej. Przeprowadziliśmy proste doświadczenia w odtwarzaniu, mieszając frakcje supernatantu, które reagowały lub nie reagowały na azydek. Eksperymenty te wykazały, że ekstrakty z serca posiadają inhibitor aktywacji azydkiem. Substancja była nietrwała, nie mogła być dializowana i prawdopodobnie była białkiem. Po wielu pracach odkryliśmy, że hemoglobina i mioglobina są inhibitorami. Kiedy wymieszano ekstrakty z wątroby i kory mózgowej, efekt azydkowy został wzmocniony lub wzmocniony, ponieważ wątroba posiadała czynnik przekształcający azydek w aktywator obu preparatów. Po oczyszczeniu czynnik ten uznano za katalazę.9
Azydek, azotyn i hydroksyloamina również zwiększały cykliczne poziomy GMP w różnych tkankach, w tym w tchawiczych preparatach mięśni gładkich.10,11 Wzrost cyklicznej GMP był związany z rozluźnieniem mięśni gładkich; dane wykazały proste zależności dawka-reakcja
[hasła pokrewne: prywatny gabinet ginekologiczny, badania przed ciążą dla mężczyzny, terapia lublin ]
[hasła pokrewne: nebbud dla dzieci, małgorzata mikulik, chlor isoton polpharma ]